Diplômée en génie civil de l’Instituto Superior Técnico - Universidade Técnica de Lisboa (Institut supérieur technique - Université technique de Lisbonne), où elle s'est spécialisée dans le domaine des infrastructures routières. Ana Castro compte 29 années d'expérience professionnelle dans l'exécution et la gestion de projets des voies de communication. Depuis 2001, elle est principalement responsable de la coordination des projets et de la gestion des complexes, notamment dans le domaine des concessions routières, intégrant et harmonisant les différentes spécialités techniques des projets d'ingénierie, ainsi que le contrôle de la qualité, des délais et du prix. Dans ce domaine, il convient de mentionner son action en tant que coordinatrice générale de la concession nord et de la sous-concession intérieure du Douro et, plus récemment, la coordination technique du projet et des tâches générales supplémentaires de la nouvelle liaison ferroviaire entre Évora nord et Elvas / Caia (faisant frontière avec l'Espagne).
En 2010, elle a occupé le poste de directrice du Département de gestion de complexes entrepreneuriaux, ayant développé son activité professionnelle dans plusieurs pays, notamment au Portugal, au Pérou et au Brésil.
Depuis 2016, elle fait partie du groupe Quadrante, où elle est chef de projet de la division voies.